腺病毒包装
腺病毒载体（adenovirus）是以腺病毒为原型进行基因功能改造改造而成的，无外壳的双链DNA病毒，病毒载体转基因效率高，体外实验通常接近100%的转导效率；可转导不同类型的人组织细胞，不受靶细胞是否为分裂细胞所限；容易制得高滴度病毒载体，在细胞培养物中重组病毒滴度可达1.0E+11PFU/ml；进入细胞内并不整合到宿主细胞基因组，仅瞬间表达，安全性高。
杭州可典生物Admax腺病毒包装系统（E1和E3双缺失），该系统是将辅助质粒和穿梭质粒共转HEK293细胞，在细胞内过Cre/loxP重组酶系统发生 重组从而获得目的腺病毒毒。该系统操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高（一般大于104vp/cell）、目的基因的表达水平高（因为mCMV启动子比hCMV启动子强若干倍）等优点。
腺病毒包装及感染示意图：
腺病毒感染细胞图片:
腺病毒产品服务流程：
相关服务信息：
1.腺病毒介导基因表达
2.腺病毒介导RNA干扰
3.腺病毒介导microRNA表达与抑制
4.腺病毒介导基因组编辑
腺病毒包装相关试剂盒：
1. 过表达腺病毒包装试剂盒
2. 干扰腺病毒包装试剂盒
3. CRISPR/CAS9-gRNA腺病毒包装试剂盒
腺病毒操作常见问题和回答
1.重组腺病毒如何保存？
腺病毒长期保存则需放置于-80℃或更低温度的环境中。在-80℃环境中腺病毒可以稳定存放12个月以上。尽可能避免反复冻融，否则会降低病毒滴度。
2.研怡生物生产的腺病毒滴度单位是什么？
腺病毒使用PFU（plaque formation unit）单位，代表可感染的或者活病毒的数量，能反映实验中所需要的活病毒剂量。
3.研怡生物腺病毒的滴度是如何测定的？
研怡生物TM腺病毒滴度是通过终点稀释法进行的测定。用一系列病毒稀释液感染单层HEK293细胞，病毒将会在感染的细胞中繁殖，并被释放出来，释放的病毒将感染邻近的细胞。这整个过程被不断重复，最终导致整个培养孔中的细胞全部出现细胞病变现象。通过出现细胞病变现象的培养孔个数和对应病毒的稀释倍数，应用公式就可计算获得病毒的滴度值。关于滴度的计算可以参考以下文献：Darling AJ, Boose JA, Spaltro J. Virus assay methods: accuracy and validation. Biologicals. 1998 Jun;26(2):105-10.
4.腺病毒如何稀释？
腺病毒使用时，先将病毒从-80℃冰箱取出，冰浴或4℃冰箱融化，可使用D-hanks，PBS，生理盐水或培养基进行稀释。
5.重组腺病毒需要的生物安全级别如何？
上海研怡所提供的重组腺病毒是E1/E3区缺失的复制缺陷型病毒。重组腺病毒的生物安全等级被确定为II级，需要在生物安全级II级的条件下进行腺病毒操作实验。
6.是否可以利用腺病毒载体系统在同一细胞株或组织中表达多个基因？
腺病毒载体系统是第一个可以在同一细胞株或组织中用来设计表达多个基因的表达系统。最简单的方法是将含有两个基因的双表达盒插入腺病毒转移载体中，或者用不同的重组病毒共转染目的细胞株来分别表达一个蛋白。测定不同重组病毒的MOI比值可正确估计各重组蛋白的相对共表达情况。
7.腺病毒载体在体外(in vitro)实验中应注意哪些问题？
由于细胞表面受体的差异，腺病毒载体在不同的细胞中转导效率不同，可以通过预实验来判断目的细胞中的腺病毒用量。病毒感染细胞的最佳时期是细胞处于对数生长期时，因此，在细胞消化后12～24小时加入病毒。病毒感染时细胞培养液的体积尽量小一些，以完全覆盖细胞为准。一般感染腺病毒24小时后就能检测到目的基因的表达，48小时表达达到较高水平。
8.如何确定感染细胞时腺病毒的最佳浓度？
最佳的实验结果需要最佳的腺病毒用量，用量少则达不到100%的感染效率，用量多可能会对细胞有毒害作用或其他不可预测的效应。为了确定目的细胞的最适病毒用量，需要在正式实验开始前，建议先完成目的细胞感染预实验，以此获得的数据作为正式实验的依据。
9.为何相同剂量的Ad-EGFP和Ad-gene-EGFP腺病毒作用细胞后，EGFP荧光强弱不同，WB检测后强度也不同？
这个问题主要是由于Ad-EGFP病毒和Ad-gene-EGFP病毒之间的差异造成的。gene-EGFP融合表达的特点就是EGFP的表达会受到目的基因大小、功能的影响。
相同病毒剂量下，相同的感染效率作用目的细胞，Ad-EGFP由于启动子作用的基因仅有EGFP，因此荧光强；而Ad-gene-EGFP由启动子作用gene和EGFP共同表达，因此荧光较弱。
有什么方法增加Ad-gene-EGFP腺病毒感染后的荧光强度吗？增加病毒用量，可以使得两种EGFP的荧光达到一致；但是当荧光达到一致时，就意味着目的基因病毒用量已经和对照组之间存在较大差异。同时过多的目的病毒可能导致细胞状态变差，实验重复性也变差，最终的数据可靠性也变差。
建议：对于目的组，多设计几个梯度感染组，确保最终数据可以比较不同剂量腺病毒感染后对于目的基因的影响，以排除因病毒过少或者过多对于实验结果的影响。
10动物实验时，一只小鼠体内注射腺病毒剂量大概是多少？在体内持续表达时间和表达高峰情况如何？
建议腺病毒用量范围在108~1010 PFU/只小鼠。注射后，大约在3~4天基因表达达到峰值；注射后7天后表达逐渐下降，持续表达时间在两周左右。
11.腺病毒载体对小鼠的半致死剂量（LD50）大概是多少？（来自本元正阳网站）
答：据我们的经验，静脉注射小鼠（昆明鼠），半致死剂量LD50大约为1×1011v.p./只；裸鼠和SCID鼠可能更敏感一些。肌注方式的LD50未测到：1×1012v.p./只给药，未发现小鼠死亡。
