服务项目

细胞生物学实验

　 　 Fubio(复百澳)生物公司拥有BD Biosciences FACSAria II流式细胞仪、Nikon Eclipse Ti-U倒置荧光显微镜、安全柜和培养箱等多种细胞功能实验设备和仪器，建立了成熟的细胞技术服务平台可为客户提供病毒包装、细胞感染、稳定株细胞株筛选、细胞周期检测、细胞凋亡检测、细胞迁移等多种实验。

部分实验结果展示：

部分实验方法说明：

1. 细胞周期检测：

a. 消化细胞，使细胞完全单个， 1500rmp × 5min 离心，弃离心上清；

b.  用预冷的PBS液洗涤细胞沉淀1次，1500rmp × 5min 离心，吸弃离心上清；

c.  70% 4℃预冷的乙醇水溶液重悬沉淀，4℃固定一小时或或更长时间 ；

d.  固定完毕后1500rmp × 5min离心，弃去上清，PBS洗涤细胞一次，同步骤；

e.  细胞染色（PI），上机检测（Cytomics? FC500 流式仪）。

2. 细胞凋亡检测 （紫外诱导凋亡法）

a. 实验前24小时，将个突变基因的稳定细胞株传代于6孔板中，约50000细胞/孔；

b. 实验时，移去原有的细胞培养基，每孔补充500ul信新鲜培养基，使其在紫外照射过程中保持湿润状态。打开细胞培养板的盖子，用紫外灯垂直照射5min后，每孔再补给2ml新鲜培养基，继续培养24H；

c. 用Annexin V-APC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒进行染色，用Beckman  Cytomics? FC 500流式细胞仪进行凋亡实验检测。

3. 划痕实验(面积计算法)

a. 实验前24小时，将各突变基因的稳定细胞株传代于24孔板中，约30000个细胞/孔。

b. 实验时用20ul的微量移液管吸头，进行划痕，划痕宽度约200um。用PBS清洗一遍后更换新鲜配制的10% FBS的DMEM培养基，选定并标记三个测量点，对其进行拍照并测量划痕区域面积，记为0 H起始时间面积。

c. 划痕后12H和24H再分别对标记点进行拍照和面积测量，分别记为12H和24H的划痕区域面积。

d. 生长速度以在相同时间内，细胞向划痕区域的生长面积的百分比计算：（12H（或24H划痕区域面积-0H划痕区域面积）/0H划痕区域面积 *100%。